CRT<sup>@</sup>bacteria检测幼儿龋病活跃性的研究

【摘要】目的探讨CRT@bacteria龋病活跃性检测法反映幼儿患龋现状及预测龋病进展状况的作用。方法以复旦大学上海医学院幼儿园104名3岁幼儿为研究对象，连续3年行口腔检查,连续两年行CRT@bacteria龋病活跃性检测(同时半定量检测变形链球菌和乳杆菌)，分别记录患龋率、龋补牙数(dft)和龋补牙面数(dfs)以及CRT-MS/LB等级分度。结果 CRT-MS/LB各度分布状况在两次检测中无显著性差异。CRT-MS/LB各度间患龋率、dft和dfs均有高度显著性差异，与dft、dfs呈高度正相关性。CRT-MS/LB首检各度与1～2年后的dft和dfs增量高度正相关。结论 CRT@ bacteria检测法能较准确地反映幼儿患龋现状，在预测龋病进展方面有较好的可信性。与CRT-LB相比，CRT-MS在预测幼儿龋病进展方面更准确、更稳定。

【关键词】龋病活跃性； CRT@bacteria；龋补牙数；龋补牙面数

龋病活跃性检测(caries activity test， CAT)是检测个体与人群对龋病的敏感程度，并预测龋病发展的一种客观的检测方法。它是一种预报性检测，特别在龋高危人群的筛选监控上有一定的意义。该检测法主要针对机体的易感性和口腔致龋菌，从菌斑、唾液和牙齿组织结构等方面进行研究分析。

变形链球菌(streptococcus mutans, MS)和乳酸杆菌(lactobacillus, LB)是目前公认的主要致龋菌，在龋病的发生和发展中起重要作用。CRT@bacteria检测法是通过同时半定量检测唾液中变形链球菌和乳杆菌菌落数来判断机体的龋活跃性，该方法在国内开展的较少，特别是追踪研究尚未见报道。

本研究采用CRT@bacteria检测法对复旦大学上海医学院幼儿园104名3岁幼儿同一个体的龋病活跃性进行了为期3年的追踪检测，并与患龋状况进行分析，研究唾液中变形链球菌和乳杆菌菌落数在反映患龋状况及预测龋病进展方面的有效性和可靠性，为龋病防治提供信息。

1 资料与方法

以复旦大学上海医学院幼儿园104名3岁幼儿为研究对象(男53名，女51名)。所选幼儿身体健康，无全身系统性疾病，牙列均为完整乳牙列，近日无使用抗菌素史。

对同一个体连续两年进行口腔临床检查和CRT@bacteria检测(2007至2008年)，第3年(2009年)仅进行口腔检查。每年检查及检测开始前对检查者进行自身标准一致性检验，Kappa值均>0.80。1.2.1 口腔检查每名幼儿均由本研究所一名富有经验的儿童口腔专科医师进行口腔检查。在幼儿园教室人工光源下，使用口镜和5号探针进行龋齿检查。龋蚀程度的检查和记录分为4度：牙釉质龋为1度牙本质浅龋为2度牙本质深龋或露髓为3度残冠或残根为4度。将检查结果记录在儿童口腔检查表中，计算龋补牙数(dft)和龋补牙面数(dfs)。失牙数因失牙原因不明，未予统计。

1.2.2 CRT@bacteria检测和结果判定龋病活跃性检测均于下午2点至3点进行，测试前需禁食、禁饮2h。

检测试剂盒由Ivoclar Vivadent Inc., Liech-tenstein生产，其专用附着板两面分别覆盖变形链球菌选择性轻唾杆菌培养基(黑色)及乳酸杆菌选择性Rogosa agar培养基(绿色)。

受试儿咀嚼特制蜡块1min，使附着在牙面上菌斑中的菌落分离，混入唾液中以加强检测效果。收集刺激性唾液于量杯中，用吸管将唾液均匀滴注于附着板的两面(要求覆盖整个板面)，置于37 ℃恒温箱中培养。48h后取出附着板，观察变形链球菌和乳酸杆菌的菌落密集度，并与标准图对比确定分度。

变形链球菌和乳酸杆菌菌落分度标准为，0度： <104CFU/ml；1度： 104～105CFU/ml；2度： 105～106 CFU/ml；3度： >106CFU/ml。0度和1度列为龋活跃性低危；2度和3度列为龋活跃性高危。

全部数据采用SPSS 17.0统计软件进行处理，采用χ2检验、方差分析、Spear-man等级相关分析及秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CRT@bacteria各度在两次检测中之分布状况

在两次检测中,CRT-MS/LB各度分布状况差异无统计学意义(Z分别为-0.600、-0.645，P>0.05)，见表1。

2.2 CRT@bacteria各度的患龋状况及相关性

2007年CRT-MS结果显示，各度间患龋率、dft和dfs差异均有统计学意义(χ2=44.035，F=17.806，F=12.485，均P<0.01)，各度与dft和dfs高度相关(r=0.669，r=0.663，均P<0.01)；CRT-LB结果显示，各度间患龋率、dft和dfs差异均有统计学意义(χ2=35.467，F=33.325，F=26.759，均P<0.01)，各度与dft和dfs高度相关(r=0.669，r=0.650，均P<0.01)。2008年CRT-MS结果显示，各度间患龋率、dft和dfs差异均有统计学意义(χ2=38.001，F=23.365，F=16.981，均P<0.01)，各度与dft和dfs高度相关(r=0.657，r=0.654，均P<0.01)；CRT-LB结果显示，各度间患龋率、dft和dfs差异均有统计学意义(χ2=22.714，F=9.799，F=7.292，均P<0.01)，各度与dft和dfs高度相关(r=0.478，r=0.469，均P<0.01)，见表2。

2.3 CRT-MS首检各度1、2年后新增患龋状况及相关性

2007年CRT-MS首检各度与1、2年后的dft和dfs增量均有高度显著性差异(F=6.812，F=12.245，F=11.113，F=16.742，P<0.01)；各度与新增患龋状况高度相关(r=0.441，r=0.492，r=0.556，r=0.584，P<0.01)。2008年CRT-MS首检各度与1年后的dft和dfs增量均有高度显著性差异(F=5.049，F=8.692，P<0.01)；各度与新增患龋状况高度相关(r=0.360，r=0.516，P<0.01)，见表3。

2.4 CRT-LB首检各度1、2年后新增患龋状况及相关性

2007年CRT-LB首检各度与1、2年后的dft和dfs增量均有高度显著性差异(F=3.674，P<0.05；F=5.666，F=11.107，F=12.374，P<0.01)；各度与新增患龋状况高度相关(r=0.414，r=0.449，r=0.525，r=0.566，P<0.01)。2008年CRT-LB首检各度与1年后的dft增量、dfs增量差异有统计学意义(F=3.060，P<0.05；F=4.290，P<0.01)；各度与新增患龋状况均高度相关(r=0.263，r=0.347，P<0.01)，见表4。

3 讨论

CAT是一种反映患龋状况并预测龋病进展的试验，可用于个体或群体测定机体对龋病的敏感度，某些发达国家已成为口腔保健检测的一部分。多年来，国外已开发出多种检测龋活跃性的商品化试剂，虽然大多数龋活跃性检测与患龋现状有关，并在一定程度上可预测龋病敏感性，至今尚无一种非常理想的检测法。

变形链球菌是公认的主要致龋菌，在龋病的发生、发展中有着极其重要的作用。变形链球菌的产酸、耐酸性决定其能够在菌斑的酸性环境中生存，并持续代谢产酸，发挥致龋作用。多数学者认为乳酸杆菌不是龋病发生的初始致病菌,其致龋作用较弱，更多涉及牙本质龋，在龋病发展过程中作用较大[1-2]。

唾液是口腔中不同组织和结构的桥梁,唾液和菌斑的细菌之间存在微生态动力平衡[2]。研究表明,唾液中的变形链球菌和乳酸杆菌计数和菌斑中相对应的致龋菌计数高度相关[2-3]。由于菌斑的采集和处理相对于唾液样本要复杂，目前多数龋病活跃性检测法以唾液为样本。检测唾液中变形链球菌和乳酸杆菌菌落数常用于评估个体或群体的龋病易感度。研究结果表明，儿童唾液中变形链球菌与乳酸杆菌计数与患龋状况相关，特别是以变形链球菌计数作为预测指标能较好地反映龋病进展状况[4-7]。

本研究结果表明，MS和LB各度人数分布状况在两次检测中无显著性差异，表明群体龋活跃性之分布相对稳定，其中龋病活跃性强者占少数，与以往报道相似[8]。CRT MS/LB各度间的患龋率、dft和dfs均有高度显著性差异，且与dft、dfs高度相关，即菌落数越多，患龋状况越严重，说明检测唾液中变形链球菌和乳酸杆菌菌落数量能反映被检测者之患龋严重程度和龋活跃性，与以往的研究结果相似[9-10]。

预测结果显示，首检SM各度与1、2年后的dft和dfs增量均有高度显著性差异；首检LB各度除与1年后的dft增量有显著性差异外，其余均有高度显著性差异。SM/LB首检各度与1、2年后新增患龋状况均高度相关，即首次检测度数越高，1～2年后新增患龋状况越严重，说明唾液中变形链球菌和乳杆菌计数与所预测的龋蚀严重程度相符合，在预测龋病进展方面亦有较高的可靠性。

从与患龋状况的相关程度上而言，LB略差于MS。乳酸杆菌虽是主要致龋菌，但对牙面的亲和力低，在牙菌斑中所占比例很小，虽能产酸但总量少，难以造成大范围脱矿破坏。因此在早期龋的发生中，乳杆菌不是主要致因素，其对早期龋预测的准确性不如变形链球菌高[1,9]。

临床工作中，对MS和LB检测结果高危并伴有龋齿的儿童，应当积极进行开放性龋齿的治疗，局部使用氟化物。同时具体分析致龋的危险因素，对患儿和家长重点进行口腔卫生宣教和饮食管理，降低龋病发病率。加强追踪观察，每3个月检查1次。对检测结果低危伴有龋齿者，除治疗龋齿、局部用氟外，应当加强口腔卫生宣教，建议每3个月检查1次，无新发龋齿后可改为每6个月复查1次。对检测结果低危无龋齿者，应仍存在患龋风险，可在局部用氟、口腔卫生宣教的基础上，每6个月复查1次。

龋病是多因素作用的疾病，任何一种龋活跃性试验都不能同时反映微生物、宿主及食物等因素的变化。因此，临床上应选用多种龋活跃性检测法，包括检测菌斑或唾液中的致龋菌数、唾液的缓冲能力和流率等，同时综合受检者的既往龋病史、饮食喂养习惯、口腔卫生习惯、社会经济地位等多种因素，才能较好的评判机体的龋活跃性，进而采取有效的龋病防治措施。

CRT@bacteria检测法操作简单，能同时半定量检测唾液中变形链球菌和乳酸杆菌菌落数，稳定性好，能较好地反映幼儿患龋现状，并能预测龋病进展状况，对龋病的防治工作有一定的指导作用。

[1] 樊明文.牙体牙髓病学[M].4版.北京：人民卫生出版社，2012： 20-22.

[2] Badet C, Thebaud NB. Ecology of lactobacilli in oral cavity： a review of literature[J]. Open Microbiol J, 2008,2： 38-48.

[3] 李志辉，何克新，朱莲娜，等.唾液和菌斑中致龋菌的相关性研究[J].广西医科大学学报，2005,22(6)： 898-899 .

[4] Thenisch NL, Bachmann IM,Imfeld T, et al. Are mutans streptococci detected in preschool children a reliable predictive factor for dental caries risk? A systematic review[J]. Caries Res，2006,40(5)： 366-374.

[5] Petersson GH, Isberg PE, Twetman S. Caries risk profiles in schoolchildren over 2 years assessed by Cariogram[J]. Int J Paediatr Dent,2010,20(5)： 341-346.

[6] Parisotto TM， Steiner-Oliveira C, Silva CM,et al. Early childhood caries and mutans streptococci： a systematic review[J]. Oral Health Prev Dent, 2010,8(1)： 59-70.

[7] Ramamurthy PH, Swamy HS, Bennete F,et al. Relationship between severe-early childhood caries, salivary mutans streptococci, and lactobacilli in preschool children of low socioeconomic status in Bengaluru city[J]. J Indian Soc Pedod Prev Dent, 2014，32(1)： 44-47.

[8] 董宏伟,石四箴,今井裕树，等.唾液中变形链球菌数与患龋状况关系的研究——同所幼儿园5年追踪观察[J].口腔医学研究，2010,26(5)： 753-755.

[9] 徐学良,张梅.CRT@bacteria检测龋病活跃性的研究[J].临床口腔医学杂志，2010，4(26)： 200-201.

[10] Bhayat A, Ahmad MS， Hifnawy T， et al. Correlating dental caries with oral bacteria and the buffering capacity of saliva in children in Madinah, Saudi Arabia[J]. J Int Soc Prev Community Dent,2013,3(1)： 38- 43.

Application of CRT@bacteria test in assessment of caries activity in preschool children

(Research Institute of Pediatric Dentistry, Tongji University, Shanghai 200032， China)

【Abstract】Objective To apply CRT@bacteria test in assessment of caries activity in preschool children. Methods One hundred and four children aged 3 years were examined for dental caries at baseline and successively for 2 years. CRT@bacteria test was performed for simultaneous detection of streptococcus mutans (MS) and lactobacilli (LB) in saliva at the 1st and 2nd years. Caries prevalence，mean dft and dfs were calculated. Results There were no significant differences in distribution rate of CRT degrees between two detections. There were highly positive correlations between CRT-MS/LB degrees and caries status (dft and dfs) in two detections. Highly positive correlations existed between CRT-MS/LB scores at baseline and the caries status (dft and dfs increment) 1-2 year later in two detections. Conclusion CRT@bacteria test is effective in reflecting the caries status and useful in predicting the caries risk in preschool children. CRT-MS is more accurate and stable in predicting the caries risk compared to CRT-LB.

作者简介：梁勤(1968—)，女，副主任医师，硕士.E-mail： fxhshanghai@sohu. com

CRT@bacteria检测幼儿龋病活跃性的研究

1 资料与方法

2 结 果

3 讨 论

2 结果

3 讨论