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郭超,张敬,石红军,张军.含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建[J].同济大学学报（医学版）,2008,(1):17-20. [点击复制]
- .Construction of pDsRed2-SilencerU6 vector to express shRNA[J].同济大学学报（医学版）,2008,(1):17-20. [点击复制]
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| 目的 构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究.方法 质粒pDsRed2-N1 中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率.结果 DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%.结论 成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础. |
| 关键词: 红色荧光蛋白 DsRed2 RNA干扰 U6启动子 红色荧光蛋白 干扰 载体 shRNA express vector 动物细胞 哺乳 表达 点突变 基因序列 编码基因 结果 转染效率 检测 脂质体转染技术 多克隆 基因片段 启动 破坏 |
| DOI： |
| 修订日期：2007-09-20 |
| 基金项目:国家自然科学基金 |
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| Construction of pDsRed2-SilencerU6 vector to express shRNA |
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| Abstract: |
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| Key words: red fluorescent protein,DsRed2,RNA interference,U6 promoter |
