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李静琪,刘立,吕立夏,李学礼,徐磊.利用同源重组构建人脑的酵母双杂交cDNA文库[J].同济大学学报（医学版）,2006,(4):36-39. [点击复制]
- .Construction of Yeast Two Hybrid cDNA Library of Human Brain through Homologous Recombination[J].同济大学学报（医学版）,2006,(4):36-39. [点击复制]
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| 摘要: |
| 目的利用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术,通过同源重组的方法,在酵母菌株Y187中构建人脑全长cDNA文库。方法利用SMART技术,以人脑总RNA为模板,反转录合成cDNA第一链。再在DNA聚合酶下,通过长距离PCR,扩增双链cDNA。同时构建pGADT 7-Rec质粒载体。纯化的ds cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态Y187,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人脑cDNA文库。结果所获得的文库容量为1.2×106,重组子不同插入片断大小在0.3~2 kb之间。结论在酵母菌株Y187成功构建了用于酵母双杂交的人脑cDNA文库。 |
| 关键词: SMART技术,同源重组,酵母双杂交,人脑cDNA文库 |
| DOI： |
| 修订日期：2006-04-23 |
| 基金项目: |
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| Construction of Yeast Two Hybrid cDNA Library of Human Brain through Homologous Recombination |
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